如果色谱柱被污染，柱子和污染物的性质决定了什么样的再生步骤会取得成功。微粒在入口筛板处聚集将导致柱背压增加。样品强吸附或在色谱柱内沉积导致背压增加，柱效降低（峰形弱，分离度差），如色谱柱被污染，以下步骤将会有用：

1. 如背压高，从进样器上拿掉色谱柱，打开泵，确认背压是由色谱柱而不是HPLC 系统造成的。也要测试下游流路确保没有微粒杂质阻塞流动相自由通过检测器。

2. 如背压高，反接色谱柱，尽量使杂质从入口处流出。初始反向流速（0.5mL/min，4.6mmID），冲洗10-15min，然后流速逐步升高到1.5-2.0mL/min。

3. 柱子也可以用强溶剂冲洗10-20 倍柱体积（反相柱用高有机溶剂，离子交换柱用高浓度盐），在不进样条件下，运行2-3 个“空白”梯度，以去除吸附不是很强的杂质。

4. 对于糖柱而言，如果高浓度糖样品注射到柱中，流动相又是高有机相（如80％乙腈），糖样品可能会沉淀在柱中。可以用50~60℃温水反向冲洗，流速升至1.0mL/min，冲洗30min，可以去除糖样品沉淀，然后再重新平衡到以前的有机相比例。

5. 如果怀疑反相柱是由于蛋白或多肽导致污染，可以注射500uL 1％十二烷基磺酸钠溶液，流速1.0mL/min（对于4.6mmID 而言），然后再梯度运行10min 乙腈 0.1％三氟乙酸体系，乙腈从5～95％。

6. 多点键合反相柱（如用于分析多肽和蛋白的知名产品214TP, 218TP, 214MS, 218MS 等）可以用一份0.1N 硝酸和4 份异丙醇低流速（一般是正常流速的20％）过夜冲洗是最有效的。注意：不建议用硝酸冲洗单点键合反相柱诸如238TP,238MS,EVEREST,DENALI, GENESIS等色谱柱。

7. 如果是脂类或疏水性很强的小分子导致柱效下降，依次用下列洗脱能力逐步增强的溶剂冲洗柱子：二氯甲烷，氯仿，或/甚至正己烷，均可能除去杂质，当从水更换到不溶于水的溶剂或返回来，中间要用互溶性溶剂过渡，这一点很重要。注意，每步冲洗10-15 个柱体积以去除痕量的不互溶溶剂。如果上述步骤均不能恢复柱效，可以向埃文森技术支持求助，同时需要提供柱子种类，序列号和批次以及问题描述，如果可能，请传真可能说明问题的

图谱，埃文森技术服务支持会尽力帮助。